菌种保藏(culture preservation,culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遗传性状的技术。或经人工选育得到的变异型纯种,使其存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异,保持菌种原有的各种特征和生理活性。基本原理是使微生物的生命活动处于休眠状态,也就是使微生物的---作用---在低范围内。干燥、低温和隔绝空气是---获得这种状态的主要措施。有针对性地创造干燥、低温和隔绝空气的外界条件,就是微生物菌种保藏的基本技术。常用的方法有冻干保藏法、深低温保藏法、液氮保藏法、矿油封藏法、固体曲保藏法、砂土管保藏法、琼脂穿刺保藏法等。日常工作中,常选用4℃冰箱进行短时间的菌种保藏
菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、---及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28~37℃培养5~14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐的种子。
虽然目前生物有机肥产品生产菌种大多采用植物根际促生菌, 但近年来很多研究发现,芽孢菌属和类芽孢菌个别菌株能产生菌素。 即便在菌种安全分级目录中列为一级免做理学试验的菌种, 如枯草芽孢菌、 多类芽孢菌、 地衣芽孢菌等个别菌株也检测到部分溶血素基因, 潜在危害不容忽视。 因此, 开展生物有机肥产品生产菌种生物安全风险评价, 从源头上把好菌种安全关是产品安全的首要保障。通过---发现, 用于生物有机肥产品的部分生产菌种分类---不明确, 甚至混乱, 难以从源头上进行安全风险的初步识别 。 以常见生产菌种枯草芽孢菌为例,低温生物菌种, 实际上是一个表型相似的群体, 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 (萎缩) 芽孢菌、莫哈韦(莫杰夫) 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索诺拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹罗芽孢菌等 10个缘种。生产企业送检的枯草芽孢菌生物有机肥产品, 经鉴定发现很多产品实际为解淀粉芽孢菌, 且许多菌株具有很强的溶血作用。通过对生产企业---发现, 部分生产企业选择分离于动物肠道的解淀粉芽孢菌作为产品生产用菌株, 该类菌种生产发酵周期短、 活菌数量高、 生产成本低, 但产品的应用功效不佳, 溶血风险大 , 建议慎用。而植物来源的解淀粉芽孢菌溶血风险小, 产品应用效果好, 使用。
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