微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法大致可分为以下几种:
1.传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧---用),培养后于4—6℃冰箱内保存。
2.液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种存活率,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3.载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4.寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如---、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。---等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5.冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒精快速---(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6.冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。
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(一)培养基保存法
利用各种斜面和半固体培养基,加上石蜡油保存菌种,是一种简易的保存方法。
1.普通琼脂斜面保存法:肠道菌、等一般---可接种于不含糖的普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏汤,以防干涸。经35℃培养18~24h后,移种于4℃冰箱中,一般可保存一个月,每月传代一次。
2.---琼脂斜面保存法:链球菌、应接种于---琼脂斜面上,35℃培养生长后,置4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次,新分离菌株须2~4天移种一次,以后逐渐延长移种时间,在适应后可延至半个月移种一次。
3.巧克力色斜面保存法:宜保存菌,并在35℃孵箱中保存,一般每2天移种一次。
4.鸡蛋斜面保存法:适于保存含有vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的---,一般可保存一个月。
5.半固体穿刺保存法:将---接种于琼脂半固体或琼脂半固体内,低温生物菌种报价,经35℃培养18~24h,低温生物菌种多少钱,再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm,置4℃冰箱保存。保存时间可达3~6个月。
(二)干燥保存法
原理是将---体内的水分蒸发掉,使其处于休眠和代谢停滞状态,从而达到长期保存菌种的目的医|学教|育网搜集整理。菌种干燥后低温保存,可保存数年至十几年。
(三)冷冻干燥保存法
本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素(低温、干燥和缺氧等),是目前有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高,低温生物菌种价格,变---小等优点,保存期一般3~5年,有的可长达10年以上。
(四)脱脂牛奶保存法
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